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在細(xì)胞實驗中，如何提高細(xì)胞凍存后的復(fù)蘇存活率？

在細(xì)胞實驗中，如何提高細(xì)胞凍存后的復(fù)蘇存活率？細(xì)胞凍存后復(fù)蘇的存活率，直接影響后續(xù)實驗的質(zhì)量和可靠性。提高細(xì)胞凍存后的復(fù)蘇存活率可以從我凍存、復(fù)蘇以及后處理三個方面進(jìn)行優(yōu)化。一、凍存階段 1.選擇合適的凍存液：最常見：90% FBS + 10% DMSO有些細(xì)胞（如干細(xì)胞）推薦使用商業(yè)化凍存液（如StemCell BankIt、Gibco Recovery™）2.細(xì)胞狀態(tài)要好：凍存前最好處于對數(shù)生長期，活力高死細(xì)胞或過度融合的細(xì)胞難以復(fù)蘇3.細(xì)胞濃度合適：推薦密度：1×10⁶～5×10⁶ cells/mL，太稀不易成活，太密會營養(yǎng)競爭4.降溫速度要慢
脂肪干細(xì)胞分離培養(yǎng)

大鼠脂肪干細(xì)胞的分離將手術(shù)切取的大鼠脂肪組織盡量剪碎后移至離心管，其余步驟與人脂肪干細(xì)胞的分離一致。增加膠原酶的量和消化時間也無法避免，取材時的毛細(xì)血管或脂肪間結(jié)締組織未被完全消化，穿過細(xì)胞篩進(jìn)入了培養(yǎng)瓶并沉淀于瓶底部形成的。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗

但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴(yán)、難度較大；病毒法的前期準(zhǔn)備較復(fù)雜、而且可能對于細(xì)胞有較大影響；所以現(xiàn)在對于很多普通細(xì)胞系，一般的瞬時轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法。本次實驗采用的脂質(zhì)體是promega公司的TransFast脂質(zhì)體試劑，它是一種陽離子脂質(zhì)體和中性脂質(zhì)體的混合物，是對于本次實驗中采用的293T細(xì)胞優(yōu)化的轉(zhuǎn)染試劑。
細(xì)胞周期檢測

細(xì)胞周期是指細(xì)胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程，分為G0/G1期、S期、G2/M期。在科研實踐中，很多實驗具有對細(xì)胞群體的周期分布進(jìn)行檢測的需求。細(xì)胞群體周期測定的方法有很多種，最常用的是PI滲入DNA進(jìn)行染色，然后通過流式細(xì)胞儀檢測PI從而測定細(xì)胞群體的周期分布。
細(xì)胞實驗介紹——細(xì)胞運(yùn)動能力檢測：

使用不同孔徑的聚碳酸酯膜transwell小室放入培養(yǎng)板中，將腫瘤細(xì)胞接種于小室中，利用培養(yǎng)液成分的差異誘導(dǎo)細(xì)胞運(yùn)動，檢測細(xì)胞的遷移和侵襲能力的差異。
細(xì)胞生物學(xué)服務(wù)

司自建有標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)房，配備有生物安全柜、超凈工作臺、細(xì)胞三氣培養(yǎng)箱、二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱、熒光倒置顯微鏡、體視鏡、酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等設(shè)備。細(xì)胞組技術(shù)人員畢業(yè)于東南大學(xué)、華中科技大學(xué)等知名高校生物學(xué)相關(guān)專業(yè)，具有碩士研究生以上學(xué)歷，熟練掌握細(xì)胞學(xué)相關(guān)實驗，可開展多種細(xì)胞實驗。